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在基因研究的前沿领域，CRISPR 技术正以其独特魅力掀起变革风暴。ADDGENE 作为科研资源的重要提供者，为大家带来了强大的 CRISPR 文库，助力探索基因的无限可能。

CRISPR 优势尽显

CRISPR/Cas 系统堪称基因编辑的神奇工具。与传统的 ZFNs 和 TALENs 技术相比，它设计简便，无需复杂的蛋白工程，仅通过设计特定的 gRNA，就能精准引导 Cas 酶对目标基因进行编辑。而且打靶效率高，最高可达 80%，大大提升实验进度。其靶位点设计灵活，载体构建简单，降低了科研门槛。同时，以 RNA 与 DNA 碱基配对的识别方式，有效降低脱靶风险，减少细胞毒性，为实验准确性提供保障。更厉害的是，它能同时对多个基因进行打靶，每增加一个靶位点只需增加一个 gRNA 质粒，这在研究基因间相互作用等复杂课题时优势明显。

丰富文库类型

·敲除文库：用于使目标基因失去功能，可靶向基因的 5' 外显子或关键蛋白结构域，每个基因通常对应3 - 10个gRNA，确保高效敲除。例如，人类全基因组敲除文库，为大规模筛选必需基因、研究基因功能提供有力支持。

·激活文库：借助 dCas9 融合 VP64 等激活结构域，靶向基因启动子区域，开启原本沉默的基因表达，探索基因在激活状态下对细胞功能和表型的影响。

·抑制文库：dCas9 与 KRAB 结构域结合，抑制基因转录，实现对基因表达的负调控研究，在研究基因过度表达相关疾病机制等方面发挥作用。

下表总结了Addgene收藏的慢病毒CRISPR文库

表1备注：此表包含可通过 Addgene 公开获取的 CRISPR 文库。文库信息来自原始文章或提供给 Addgene 的信息。除非另有说明，文库靶点为全基因组。每个基因的 gRNA 数值为文献中报告的近似值。文库名称后括号内为 Addgene 标识号。

应用前景广阔

在医疗领域，助力基因功能研究，加速药物开发进程，精准定位疾病相关基因靶点，为攻克疑难杂症带来希望；在农业方面，用于作物育种，增强作物对环境胁迫的抗性、优化作物品质，实现粮食增产与可持续发展。从全基因组的 CRISPR 敲除筛选，到检测细胞耐药性基因组位点，再到植物基因功能挖掘，其应用场景不断拓展。

图2备注：使用混合慢病毒 CRISPR 库的实验流程图。 （A）gRNA 文库的扩增与验证以及慢病毒的产生。将质粒 DNA 转化至大肠杆菌中，并在含有相应抗生素的 LB 琼脂平板上培养。通过对转化样本进行稀释培养可以估算转化中的质粒总数（例如，稀释培养法）。从转化的大肠杆菌中分离出扩增的库并进行 NGS 检测，以比较扩增库与原始库存的代表情况。然后将扩增且经过验证的库转染至带有适当包装和包膜质粒的标准HEK细胞或慢病毒包装细胞系中，以生成慢病毒 gRNA 库（含 Cas9）。 （B）通过单个 gRNA 与 Cas9 的共表达生成突变细胞。对于多载体 CRISPR 库，必须在转染 gRNA 库之前先生成一个表达 Cas9 的稳定细胞系（实线）。对于单载体库，可以直接从野生型细胞一步生成突变细胞（虚线）。无论哪种情况，使用 gRNA 库进行转导时的摩尔浓度必须较低（<1），以确保每个细胞仅含有单一的 gRNA（每一步中减少的培养板数量表明，随着每次筛选的进行，细胞总数会减少）。（c）使用 CRISPR 工程突变细胞进行筛选。混合CRISPR文 库与阳性筛选或阴性筛选兼容。在阳性筛选（如药物耐药性筛选）中，突变细胞会接受药物或载体对照处理，并使用 NGS 来识别能赋予药物耐药性的 gRNA（即基因）。在阴性筛选（如细胞存活筛选）中，突变细胞会在有限的时间内生长，并使用 NGS 来识别与初始时间点相比在较晚时间点减少的基因。

注：gRNA，引导 RNA；NGS，下一代测序

实验流程概览

实验时，先根据研究目的精心选择合适文库，如全基因组文库用于无偏筛选，靶向文库针对特定基因家族或功能类别。接着对文库进行扩增，确保足够数量用于后续实验。通过慢病毒将 gRNA/Cas9 系统导入靶细胞，控制感染复数，保证单个细胞整合单个 gRNA。筛选出具有目标表型的细胞，利用下一代测序技术分析富集或耗尽的 gRNA，确定关键基因。

如果您也渴望在基因研究中取得突破，ADDGENE 的 CRISPR 文库是您的理想之选。您可登录addgene.org查找所需质粒，通过乐动网页版_乐动（中国），致电 400 - 8100 - 881/010 - 84415678 或发送邮件至 addgene@sinozhongyuan.com 下单订购 。让我们携手，借助 ADDGENE的CRISPR 文库，开启基因研究新征程！

为什么选择addgene？

Addgene 是全球最重要、最广泛使用的非营利性质粒保藏与分发机构，在生命科学研究中扮演着核心基础设施的角色。

核心使命：

·促进科研材料的共享与可重复性： 解决科学家之间索要/寄送质粒耗时耗力、易出错、易丢失的问题，建立一个标准化、可靠的质粒获取渠道。

·永久存档： 为重要的质粒资源提供永久性的、安全的存储和备份，防止因实验室关闭或人员流动导致珍贵质粒丢失。

·加速科学发现： 通过降低获取重要研究工具的门槛，加速全球科学研究的进展。

资源规模与范围：

海量资源： 拥有超过 158,900个 质粒（数量持续快速增长）。

覆盖广泛： 涵盖几乎所有生命科学领域，尤其以以下工具著称：

14. CRISPR工具： gRNA载体、Cas酶变体、报告基因、筛选文库等（最大最全的CRISPR公共资源库）。
14. 荧光蛋白： GFP, RFP, YFP等各种颜色、变体、融合标签。
14. 病毒载体： AAV, 慢病毒, 逆转录病毒载体（穿梭质粒/包装质粒）。
14. 基因表达： 启动子、诱导系统、siRNA/shRNA载体、过表达载体。
14. 信号通路工具： 报告基因、激酶、磷酸酶、突变体等。
14. 模型生物专用载体： 适用于细菌、酵母、果蝇、线虫、斑马鱼、小鼠、植物等。
14. 连接/克隆工具： Gateway, Gibson Assembly, Golden Gate, TA/TOPO等各种克隆系统的载体骨架。

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参考文献：

McDade, J.R., Waxmonsky, N.C., Swanson, L.E., and Fan, M. 2016.Practical considerations for using pooled lentiviral CRISPR libraries.

Curr. Protoc. Mol. Biol. 115:31.5.1-31.5.13.doi: 10.1002/cpmb.8